После пункции фолликулов и получения яйцеклеток начинается эмбриологический этап программы ВРТ. От его результатов во многом зависит, наступит ли беременность. Эмбрионы после ЭКО культивируются в эмбриологической лаборатории. Туда в отличие от других помещений клиники доступа для пациентов нет. Эта статья приоткроет завесу тайны и расскажет про развитие эмбриона по дням после ЭКО.
Этапы развития эмбриона при ЭКО
Во время трансвагинальной пункции врач-репродуктолог прокалывает фолликулы и аспирирует их содержимое (фолликулы — «пузырьки» в яичниках, в которых находятся и созревают яйцеклетки). Фолликулярная жидкость сразу передаётся в эмбриолабораторию, и начинается эмбриологический этап программы ЭКО. Главное действующее лицо этого этапа — специалист-эмбриолог.
Оплодотворение яйцеклетки
Получив содержимое фолликулов, эмбриологи под микроскопом отбирают из него ооцит-кумулюсные комплексы, которые содержат яйцеклетки. Эти слизистые комочки диаметром несколько миллиметров. можно разглядеть даже невооруженным взглядом. До оплодотворения, на 4—6 часов, ооцит-кумулюсные комплексы помещают в чашки Петри со специальной питательной средой.
Параллельно специалисты обрабатывают сперму, выделяя из неё фракцию сперматозоидов, которые наиболее способны к оплодотворению (будущий папа сдаёт эякулят в день пункции). При отсутствии возможности присутствовать в клинике в день пункции можно воспользоваться замороженным эякулятом.
Следующий шаг — экстракорпоральное оплодотворение. Эмбриологи добавляют к яйцеклетке в чашку Петри тысячи сперматозоидов, дальше всё происходит практически естественным путём. При мужском факторе бесплодия, а также при использовании замороженных яйцеклеток оплодотворение проводят методом ИКСИ (ICSI, интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов). Процедура ИКСИ включает отбор лучшего сперматозоида и введение его в цитоплазму яйцеклетки специальной тонкой иглой.
День пункции и оплодотворения считается нулевым днём эмбриологического этапа программы ВРТ.
День первый
На следующий день после оплодотворения эмбриолог оценивает, насколько успешным оно было. Если всё в порядке, то через 12–16 часов после экстракорпорального оплодотворения в ооците присутствуют два клеточных ядра (пронуклеуса) — женское и мужское. Яйцеклетка стала зиготой, и теперь в ней двойной набор хромосом: от мамы и от папы. Зигота — название стадии развития эмбриона при ЭКО и естественном зачатии. Клетки, в которых нет двух пронуклеусов, отбраковывают.
День второй
На вторые сутки развития пронуклеусы сливаются, и зигота начинает дробиться. С этого момента её можно считать эмбрионом. На вторые сутки эмбрион состоит из 2—4 клеток, которые называются бластомерами. В дальнейшем деление эмбриона при ЭКО продолжится, этот процесс называется дроблением.
День третий
На третий день в эмбрионе, состоящем уже из 6—8 клеток-бластомеров, формируется собственный геном, ставший результатом слияния материнского и отцовского генетического материалов. Дальнейшее развитие зависит от того, насколько геном правильный и насколько своевременно запустится. Именно на третьи сутки останавливается развитие большей части некачественных эмбрионов — происходит «блок развития», важная составляющего естественного отбора.
День четвёртый
На четвёртый день контакты между эмбриональными клетками становятся плотнее, а сам эмбрион — компактнее. Он уже на стадии морулы. Название связано с внешней схожестью эмбриона с тутовой ягодой (morum на латыни). Начинает работать собственный геном. При естественном зачатии именно на стадии морулы эмбрион покидает маточную трубу и оказывается в полости матки. Но в программе ЭКО ему предстоит ещё некоторое время провести в лаборатории.
Пятый-шестой день
На пятые сутки, когда в моруле начинается формирование полости, эмбрион переходит на следующую стадию развития. Он становится бластоцистой. Бластоциста отличается сложной клеточной структурой, в ней уже примерно две сотни клеток. Диаметр эмбриона человека на стадии бластоцисты равен приблизительно десятой части миллиметра.
На пятые сутки начинается процесс хетчинга – защитная оболочка эмбриона истончается, чтобы он мог её покинуть. Это означает, что бластоциста готова к имплантации. Если хетчинга не произойдёт, эмбрион не сможет внедриться в эндометрий. Поэтому при подозрении, что самостоятельно бластоциста не справится с «вылуплением» из оболочки, проводится процедура вспомогательного хетчинга. В нашем центре репродукции оболочка иссекается лазером. Лазерный хетчинг считается наиболее безопасным для зародыша.
Подсадку эмбриона в полость матки пациентки лучше всего проводить на стадии бластоцисты. Преимплантационное генетическое тестирование делают только бластоцистам. Замораживают тоже только их. Это связано с тем, что пяти- или шестидневный эмбрион лучше синхронизирован с состоянием эндометрия и имеет больше перспектив для имплантации.
Условия культивирования эмбрионов
Развитие эмбрионов зависит от качества половых клеток женщины и мужчины. Но на результат эмбриологического этапа влияют и условия в лаборатории. Для зарождения новой жизни необходимо оптимальное соотношение температуры, влажности и газового состава. Задать и поддерживать нужные параметры позволяют специальные инкубаторы, в которых эмбрионы развиваются все пять-шесть дней. К культуральным средам, в которых «растут» эмбрионы, тоже предъявляются жёсткие требования. Благодаря своему составу эти среды воссоздают внутреннюю среду материнского организма.
Задача эмбриологов не только провести оплодотворение и создать благоприятные условия для поддержания жизнедеятельности эмбрионов, но и наблюдать за их развитием. Зная, как развивались эмбрионы, можно объективно отобрать самые перспективные для переноса и криоконсервации.
Поэтому во время культивирования специалисты периодически оценивают состояние своих подопечных и вносят данные в эмбриопротокол. Данные вносятся в буквенно-цифровых обозначениях. Когда эмбрионы достигают стадии бластоцисты, проводится финальная оценка и выбор бластоцист с высоким потенциалом к имплантации в полости матки.
В большинстве случаев этап культивирования занимает 5—6 дней. Реже эмбриологами и репродуктологом принимается решение о переносе трёхдневного эмбриона. Такой подход применяется, например, после неудачных переносов бластоцист, или когда удалось оплодотворить всего одну яйцеклетку.
Частые вопросы пациентов. Могут ли при ЭКО перепутать эмбрионы в лаборатории?
В нашем центре репродукции это невозможно. В «Линии жизни» строго соблюдается система идентификации будущих родителей и репродуктивного биоматериала. Эмбриолог никогда не работает одновременно с эмбрионами разных пациентов, на его столе может находиться биоматериал только одной пары. Завершив манипуляции, специалист возвращает его в инкубатор на подписанное место. Кроме того, в лаборатории действует принцип «двойного контроля». Он означает, что действия одного эмбриолога всегда проверяются вторым специалистом.
Финальная оценка качества эмбрионов
На пятый-шестой день качество бластоцист оценивается по нескольким критериям. Результаты эмбриологи заносят в эмбриопротокол в виде буквенно-цифровых обозначений. Во внимание принимают:
- Размер. Обозначается цифрами от 1 до 6. Цифра 1 означает раннюю, маленькую бластоцисту, 2 — небольшую, 3 — растущую. Цифра 6 говорит о том, что уже завершился процесс хетчинга.
- Качество внутриклеточной массы (ВКМ). Обозначается буквами А, B и С. А означает отличное качество, С – низкое.
- Качество трофэктодермы. Трофэктодерма — слой клеток, из которого после имплантации образуется плацента. Обозначается буквами аналогично качеству внутриклеточной массы.
Перспективными для переноса и криоконсервации считаются бластоцисты (Bl) размера от 3 до 6, имеющие качественную ВКМ и качественную трофэктодерму. Такие эмбрионы обозначаются в эмбриологическом протоколе как Bl5AА, Bl4AВ. Средние по качеству – Bl2BВ, Bl3BВ. Обозначение Bl1CС говорит о бластоцисте низкого качества.
Эмбриологи оценивают бластоцисты визуально, пусть и под микроскопом с многократным увеличением. Поэтому высокая оценка повышает шансы на имплантацию, но не гарантирует её. Бывает, что эмбрионы-отличники не имплантируются. С другой стороны, перенос бластоцисты среднего качества нередко приводит к достижению беременности и здорового ребёнка.
Есть ещё один важный момент. Стандартная оценка под микроскопом, даже если её выполнили лучшие эмбриологи, не позволяет выявить ошибки в хромосомном наборе эмбриона. Хромосомные сбои могут быть и у бластоцисты Bl5AА. Эмбрионы с хромосомными нарушениями называются анеуплоидными. Риск получения анеуплоидных эмбрионов повышается в позднем репродуктивном возрасте женщины (старше 35 лет). Но они могут быть получены и у более молодых пациенток. Перенос эмбрионов с хромосомными нарушениями — распространённая причина отсутствия имплантации в программах ВРТ.
Единственный способ выявить хромосомные аномалии — проведение преимплантационного генетического тестирования эмбрионов (ПГТ-А). Это исследование рекомендуется пациентам позднего репродуктивного возраста, а также после нескольких неудач имплантации при переносе морфологически качественных эмбрионов.
Что происходит с эмбрионом после переноса?
Эмбрионы получены, один из них репродуктолог перенёс в полость матки. Теперь всё зависит от того, произойдёт ли имплантация. Если бластоциста не имплантируется, для достижения беременности потребуется ещё одна попытка. Когда имплантация происходит, беременность развивается по тем же природным законам, как и достигнутая естественным путём. То есть, развитие плода по дням после ЭКО не имеет каких-то особенностей.
В том, как происходит имплантация после переноса в цикле ВРТ, тоже нет отличий от наступления естественной беременности. Попав в полость матки после переноса эмбрион прикрепляется полости матки. После прикрепления всё глубже погружается в него. Из трофэктодермы образуются ворсинки трофобласта. После присоединения к капиллярам организма женщины, они будут обеспечивать плод кислородом и питательными веществами, а также возьмут на себя вывод продуктов распада.
Оболочка эмбриона после имплантации начинает усиленно вырабатывать хорионический гонадотропин человека (ХГЧ). Этот гормон активизирует продукцию прогестерона жёлтым телом. Прогестерон в свою очередь создаёт необходимые условия для благополучного развития беременности. Именно по росту концентрации ХГЧ в крови женщины врачи определяют, произошла ли имплантация.
Кровь для теста на ХГЧ пациентки клиник ЭКО сдают через 12—14 дней после переноса. Через 20 дней после процедуры переноса для окончательного подтверждения беременности проводится УЗИ.
Эмбриология в Центре репродукции «Линия жизни»
Эмбриологическая лаборатория — сердце и гордость нашего центра репродукции. В ней волшебством зарождения новой жизни занимаются высококвалифицированные эмбриологи. Специалисты постоянно повышают свой уровень, участвуют в российских и международных конференциях. Эмбриологи «Линии жизни» знают, как правильно провести оплодотворение, и как позаботиться о развитии эмбрионов.
В их распоряжении передовое оборудование — микроскопы с многократным увеличением, лазерное оборудование, чтобы проводить вспомогательный хетчинг и биопсию эмбрионов для ПГТ, инкубаторы с тонкими настройками важных параметров. Самые современные культуральные среды помогают создавать идеальные условия для развития эмбрионов. Международный уровень эмбриологической лаборатории клиники «Линия жизни» подтвержден независимым аудитом, который проводила зарубежная компания. Хотя многое зависит от качества яйцеклеток и сперматозоидов, оснащённость лаборатории тоже имеет огромное значение.
Для будущих родителей эмбриологический этап проходит за закрытыми дверями лаборатории. Но наши пациенты имеют доступ к данным о своих эмбрионах в онлайн-режиме. Такую возможность даёт сервис «Мой эмбриопротокол». Кроме того, лечащий репродуктолог работает в связке с эмбриологами и держит пациентов в курсе дела.
Путь к рождению малыша с помощью ЭКО в клинике с хорошей эмбриологией начинается с консультации репродуктолога. Записывайтесь к врачам «Линии жизни» по телефону и через онлайн-чат на сайте.
